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Sistema pUT mini-Tn5 |
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Los mini-Tn5 son elementos móviles capaces de transportarse de un cromosoma a un plásmido. Dicha actividad está codificada por el gen tnp*, presente en cis en el plásmido aunque externo al elemento mini-Tn5. Los vectores pUT mini-Tn5 son utilizados para insertar fragmentos de ADN en el cromosoma bacteriano, clonando dentro de la región mini-Tn5. Debido a la pérdida del gen tnp* después de la inserción, los minitransposones son integrados en el cromosoma y heredados de manera estable. Los diferentes vectores pUT mini-Tn5 pueden utilizarse en repetidas inserciones, por lo que las inserciones múltiples en una misma cepa solo están limitadas por la capacidad del diferente marcador de selección.
| Aplicaciones:
- Clonación.
- Mutagénesis insercional.
- Ensayos de promotores.
-Generación de fenotipos condicionales y mutaciones no polares.
- Análisis de terminadores transcripcionales.
- Aplicaciones medioambientales: etiquetado con genes marcadores para la monitorización de puesta en libertad de microorganismos y/o regulación transcripcional en el medio ambiente.
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Ventajas:
- Inserción fácil y estable de ADN heterólogo en el cromosoma de la cepa de interés, después de unas simples manipulaciones genéticas.
- Replicación eventual de la entrega del plásmido para permitir la selección de la integración del elemento transponible en el cromosoma.
- Amplio rango del tamaño del fragmento insertado.
- Posibilidad de múltiples inserciones en una misma cepa.
- Fácil modificación del vector clonado.
- Uso de sitios de corte de enzimas de restricción poco frecuentes como NotI and SfiI.
- Amplio rango de cepas receptoras Gram negativas.
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