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INGENIERÍA GENÉTICA
Sistema pUT mini-Tn5
Los mini-Tn5 son elementos móviles capaces de transponerse desde un plásmido al cromosoma bacteriano. La actividad transposasa necesaria está codificada por el gen tnp*, presente en cis en el plásmido aunque externo al elemento mini-Tn5. Los vectores pUT mini-Tn5 son utilizados para insertar fragmentos de ADN en el cromosoma bacteriano, clonando previamente dichos fragmentos dentro de la región mini-Tn5. Debido a la pérdida del gen tnp* después de la inserción, los minitransposones son integrados en el cromosoma y heredados de manera estable. Los diferentes vectores pUT mini-Tn5 pueden utilizarse en inserciones secuenciales, siendo posible la construcción de cepas con distintos fragmentos integrados.
Aplicaciones:
Algunas de las aplicaciones más comunes de los vectores pUT mini-Tn5 son:
- - Clonación e inserción estable del fragmento clonado.
- - Mutagénesis insercional.
- - Ensayos con promotores.
- - Generación de fenotipos condicionales y mutaciones no polares.
- - Análisis de terminadores transcripcionales.
- - Aplicaciones medioambientales: etiquetado con genes marcadores para la monitorización de puesta en libertad de microorganismos y/o regulación transcripcional en el medio ambiente.
Ventajas:
- - Inserción fácil y estable del ADN heterólogo en el cromosoma de la cepa de interés, después de unas simples manipulaciones genéticas.
- - Amplio rango del tamaño del fragmento insertado.
- - Posibilidad de múltiples inserciones en una misma cepa.
- - Easy modification of the cloning vector.
- - Uso de dianas para enzimas de restricción de corte poco frecuente como NotI y SfiI.
- - Amplio rango de cepas receptoras Gram negativas.